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Porque un evento de transformación es raro y costoso?



1. En todo el proceso hay muchos pasos "poco probables" involucrados, debido a los siguientes obstáculos:
  • Tener que introducir ADN en células vivas.
  • Lograr que el ADN sea insertado en forma estable, en los propios cromosomas de las células, haciendo viable su replicación.
  • Lograr que esta inserción sea funcional


2. No hay forma de controlar adonde se ubicara el ADN extraño:
  • Podría no ser funcional, dependiendo del sitio de inserción.
  • Podría afectar o anular la acción de algún gen importante de la planta.

Los primeros desafíos:


Tolerancia a Glifosato

Objetivo: Transformar plantas sensibles en altamente tolerantes, para su aplicación directa.

Origen: El Glifosato inhibe una enzima vegetal (EPSPS), necesaria para el crecimiento celular

Intento 1: Adicionar una nueva copia del gen para EPSPS, de petunia, con un promotor fuerte, para aumentar la concentración de EPSPS en la planta, y lograr tolerar mayores dosis de Glifosato.

Resultado 1: Aun con mas EPSPS, las plantas fueron todavía muy sensibles, como para ser de interés comercial.



Tolerancia a Glifosato: 2do Intento

Objetivo: Generar mutantes de algún organismo fácil de cultivar, hasta hallar algún individuo tolerante a Glifosato.

Intento 2: Un aislamiento de Agrobacterium resulta menos sensible, pero su EPSPS es aun funcional; se la transfiere a plantas TG.

Resultado2: En soja, ambos mecanismos sumados funcionan adecuadamente, no así en maíz, que requiere trabajo adicional.


 


 

Tolerancia a Glifosato: 3er Intento

Objetivo: Encontrar un microorganismo que produzca una enzima capaz de detoxificar la molécula de Glifosato (GOX de Achromobacter sp.).

Intento 3: Juntar los efectos del gen para esta enzima con el gen mutante de EPSPS, en plantas de maíz.

Resultado 3: Este intento, involucrando ambos genes resulto efectivo, logrando que las plantas estén protegidas por producir EPSPS insensible al herbicida, mas la capacidad de detoxificar parte del mismo.

Tecnología Bt

Objetivo: Lograr que la planta produzca su propio insecticida.

Origen: Algunos insectos pueden ser controlados mediante la aplicación de Deltaendotoxinas de Bacillus thuringiensis. Estas toxinas son altamente selectivas e inocuas para el hombre y el ambiente, pero se desdoblan rápidamente cuando están expuestas a la luz ultravioleta.

Intento 1: Poner el gen completo para la toxina-proteína en la planta, con un fuerte promotor que funcione en todos los tejidos.

Resultado 1: Aun con una transformación exitosa, la planta no producía suficiente proteína para protegerse a si misma.

Tecnología Bt: 2do Intento

Origen: Cuando la toxina natural (potoxina) entra en el intestino del insecto, se desdobla en la toxina activa, de cadena mas corta, por acción de las enzimas del insecto.

Intento 2: Insertar un gen truncado que solo codifique para la porción de la proteína correspondiente a la toxina activa.

Resultado 2: La planta produce mucho mas toxina ahora, pero seria conveniente aun mas.


Tecnología Bt: 3er Intento

Origen: La planta "prefiere" usar ciertos codones para algunos aminoácidos. Cuando no tiene estos codones "preferidos" produce mucha menos proteína. Muchos de los codones en un gen bacterial, no son los "preferidos", por lo tanto el gen no se expresa bien en la planta.


Intento 3: Realizar cambios en el ADN del gen, base por base, de manera que codifique para los mismos aminoácidos, pero usando los codones "preferidos".


Original     TTAGCACCCTAGGCTAGCGTA
Modificada TTACCACCCTACGCTAGCCTA


Resultado 3: Cuando el gen es trucado y además tiene los codones "preferidos", expresa suficiente toxina para su autoprotección.



El ABC de la Biotecnología

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