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ADN


Transfiriendo los genes a las plantas. Opciones de Transformación.

Métodos


Agrobacterium tumefaciens

Gene Gun

1. Agrobacterium. Uso de una bacteria como "Ingeniero Genético Natural". La bacteria conteniendo el inserto, infecta las células de la planta produciendo la recombinación genética.

2. Acelerador de Partículas (Gene Gun). Un cañón artificial bombardea micropartículas con el inserto, sobre la célula.

3. Electroporación. Uso de carga eléctrica para que el ADN atraviese la membrana nuclear. La corriente, fuerza el paso de los insertos al interior del núcleo.

4. Polietilenglicol. La exposición de las membranas al PEG, facilita el movimiento de las moléculas de ADN.

5. Silicon Wiskers. Inyección mediante fibras microscópicas. Las fibras atraviesan las membranas, llevando los insertos.

Transformación por Agrobacterium:


Fundamentos

1. El patógeno de suelo Agrobacterium tumefaciens, naturalmente inserta su ADN (plásmido Ti), en las células expuestas de sus huéspedes, en tejidos radiculares dañados.

Transferencia de genes al huesped

Tumor o callo

2. Este ADN extraño se incorpora y recombina con el ADN propio de la planta huésped, dividiéndose y creciendo al azar, como un tumor.

 

 



3. El ADN de Agrobacterium toma el control de las células del tumor, causando la síntesis de aminoácidos inusuales que sirven de soporte nutricional a la bacteria.


Preparando un gen para una transformación mediante Agrobacterium


1. Las secuencias del plásmido Ti, responsable de la virulencia de la bacteria, se remueven (vírgenes).

Bacteria sin virulencia

Estructura del plasmido integrado

2.En otra bacteria, se ubica el gen deseable, entre las dos secuencias de borde del plásmido Ti.

3. Se integra el inserto que contiene el gen deseable, dentro del plásmido Ti, al ser incorporado nuevamente dentro del Agrobacterium.

4. Bacteria clonada, lista para transformar.

bacteria clonada


Resumen:



Transformación mediante Agrobacterium

1. Armar dos construcciones; una con los genes a incorporar (gen principal y marcador), y otra con las secuencias necesarias del plásmido Ti.

2. Integrar todo esto en un solo plásmido, en Agrobacterium, y usar este clon para infectar tejido vegetal.

3. Exponer el tejido tratado al agente químico selectivo (antibiótico o herbicida). Solo las células exitosamente transformadas, sobrevivirán.
4. Usar métodos de cultivo de tejidos para regenerar plantas viables de las pocas células sobrevivientes.
Cultivo de tejidos

Transformación por Acelerador de Partículas (Gene Gun)


1. Incorporar el inserto en un plásmido y hacer un gran numero de copias en una bacteria.

Copiado de bacterias

Microparticulas recubiertas

2. Extraer los plásmidos y cubrir con ellos pequeñas partículas de tungsteno (1 micrón).

Disparo de particulas

3. Disparar las partículas mediante una explosión, sobre los tejidos.
4. Exponer las células al agente selectivo para regenerar aquellas exitosamente transformadas.
Regeneracion tejidos transformados

El ABC de la Biotecnología

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