Capturando el Gen Tomar la pieza de ADN
buscada desde el organismo donante
1. Se extrae ADN de muchas células,
y se corta en pequeñas piezas.
2. Las piezas se mezclan con plásmidos
cortados con la misma enzima, las cuales al
conjugarse conforman distintos plásmidos.
3. Los plásmidos, colocados de
nuevo en bacterias, son ahora distintos, y entonces
pueden ser separados.4. Ahora, cada pieza de ADN puede copiarse tanto
como sea necesario.
Encontrando
el Gen correcto
1. Los plásmidos usados en
la bacteria (vectores clonados), también
contienen un gen de resistencia a antibióticos,
de manera que solo aquellas que tengan el nuevo plásmido
recombinante, crecerán en el medio de cultivo.
Este gen se llama "marcador
selectivo".
2. Cada clon (progenie de
bacterias con la nueva secuencia de ADN), puede
ser probada para saber si contiene el gen
deseado. Hay diversas maneras, dependiendo del carácter
en cuestión.
Lo
que acompaña al Gen:
La construcción
1. Los genes deben "estar prendidos"
para expresarse; para eso se usa el promotor.
2. El ARNm debe ser modificado para salir
del núcleo, con los terminadores.
3. Es necesario saber cuales (poco frecuentes) células
han sido modificadas; para eso se agrega un gen
marcador selectivo.
4. La combinación terminada del gen + promotor +
marcador selectivo + terminadores, se llama construcción
o inserto.
Promotores:
dónde se "prenderá" el gen?
1. Para que el ADN
transcriba el gen en ARNm, debe haber un
promotor delante de la secuencia.
2. Algunos promotores
activan el gen en casi todas las células de la
planta (Pr. Constitutivos).
3. Algunos solo lo hacen en
las partes verdes.
4. Otros promotores solo
trabajan en tejidos específicos, como polen, raíz
o tejidos dañados.
Marcadores Selectivos
1. El tipo mas común es el de un
gen que codifica para una enzima, que desdobla algún
antibiótico o componente del herbicida.
2. El gen marcador también
necesita un promotor y terminador.
nptll -------------->kanamicína
3. Normalmente la planta moriría ante el
químico. Solamente sobrevivirá si ha sido
exitosamente modificada para poseer esta enzima.
Inserto
listo para ser transferido a una planta
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